本文摘要：本文对比了差式扫描量热法（DSC）与差式扫描荧光法（DSF）两种常用的生物大分子高级结构稳定性表征技术，旨在帮助您了解这两种技术的异同，从而在评估各类生物大分子的稳定性时选择最合适的分析工具。评估生物大分子的稳定性是至关重要的，因为这直接关系到其在新药研发、疾病诊断、治疗方案以及基础生物医学研究中的应用效果。

稳定性评估确保生物大分子在制备、存储、运输及使用过程中能够维持其结构与功能，进而发挥预期的生物活性，提高生物医药产品的疗效和安全性。此外，稳定性数据对于优化生物大分子的生产和纯化流程、延长其货架期、降低成本，以及推动科学研究的深入都有不可或缺的作用。在生物技术药物开发的“质量源于设计”（QbD）方法中，稳定性表征是所有候选药物“开发可行性”和“成药性”评估的关键组成部分。

DSC与DSF，两者之间的细微差别却具有重大影响。首先，我们来探讨测试原理：

01 测试原理

DSC：该方法通过在恒定加热速率下观察生物大分子从自然状态（折叠）到变性（展开）的过程，监测非共价键断裂所吸收的热量变化，可以实时获取热容（Cp）的变化，并通过数据处理获得热力学信息，如Tm值、Tonset、ΔH、ΔCp等。

DSF：通过监测由于色氨酸从疏水环境转变为亲水环境所引发的发射波长变化或荧光信号的变化，获取生物大分子的稳定性相关参数，如Tm和Tonset。

02 适用样品类型

DSC：适用于多种类型的生物分子，如蛋白、核酸和脂质等，因其能够监测生物分子高级结构的非共价键断裂。

DSF：则主要适用于含有丰富色氨酸或疏水区域的特定蛋白样品，限制了其在核酸、脂质等样品的应用。

03 相关参数含义（Tm、ΔHcal）

DSC获取的Tm值对应体系中50%生物分子变性时的温度，而ΔHcal为每摩尔蛋白变性所需吸收的热量，通常用于评估生物分子的活性含量。

DSF的Tm值对应50%色氨酸或疏水区域暴露时的温度，但无法真实反映蛋白的变性过程及获得样品的其他活性信息。

04 应用

DSC具有良好的重复性，适合在不同批次间进行一致性分析和生物相似性评估，也可以评估多结构域样品的稳定性。

DSF的重复性较差，适合快速初步筛选稳定性，但不适用于详细的定量分析。

05 结论

与DSF技术相比，DSC在多方面拥有显著优势，被公认为生物医药行业中热稳定性实验的金标准技术。它无需标记，适用的样品类型更为丰富，不受荧光背景及缓冲成分的干扰，能够提供丰富的热力学信息，如Tm以外的多个参数，并且具有高分辨率和重复性，非常适合于对不含色氨酸的蛋白样品或其他非蛋白样品的分析。如果您正在寻找精准评估生物大分子稳定性的解决方案，XPJ的DSC技术将是您的最佳选择！