病毒载体由于其在CRISPR组分高效递送方面的优势，已成为基因治疗研究中的重要工具，尤其在转染难度大的分化细胞中表现出色。不同类型的病毒载体能够实现高效的体内递送，但其复杂的生产工艺和较高的成本在一定程度上限制了其广泛应用。与质粒相比，病毒载体的生产包括额外步骤：需将CRISPR组分克隆至转移载体，并随后包装成病毒颗粒，这一劳动密集型特征进一步增加了规模化生产的挑战。

基于慢病毒的递送方式

基于慢病毒的递送方式因其与电穿孔相当的基因递送效率，成为CRISPR组分递送的热门工具，尤其适合大规模CRISPR文库筛选。慢病毒的一个显著优势是能够将转基因整合至宿主基因组，实现长期表达，这在过表达实验中具有重要价值。然而，基因组整合所带来的插入突变风险限制了其在临床体内的应用。目前，慢病毒主要用于基础研究和体外基因修饰，典型案例包括FDA批准的CAR-T癌症疗法及治疗β-地中海贫血症的Zynteglo。

需要注意的是，慢病毒在递送CRISPR时，Cas9的持续表达可能导致脱靶效应。可诱导表达系统或整合酶缺陷型慢病毒（IDLV）能够有效缓解这一问题，IDLV将基因组整合率降低约500倍。虽然其转导效率相较于常规慢病毒略低，但在体外及体内神经元中的递送效率与传统载体相当，展示了对中枢神经系统疾病治疗的独特潜力。

基于AAV的递送方式

基于腺相关病毒（AAV）的递送方式面临两个主要技术瓶颈：首先，它的载体容量限制（约42kb）明显低于慢病毒载体；其次，转导效率相对较低。为了应对容量问题，研究者们提出了几种解决方案：采用序列较小的SaCas9；采取双载体共递送策略（分别装载Cas9与gRNA）；以及使用SpCas9分割表达技术，通过两个载体递送SpCas9片段以形成完整的功能蛋白。

值得一提的是，AAV系统在临床上具有独特的优势，其多样化的血清型选择可以实现组织特异性靶向。此外，结合衣壳定向进化技术，能够优化衣壳蛋白，进一步提升递送的精准度和治疗效果。目前虽然尚无基于AAV的CRISPR疗法获得FDA批准，但AAV平台已在其他基因药物中取得了成功，比如治疗脊髓性肌萎缩的Zolgensma®，为CRISPR-AAV疗法的临床转化提供了重要参考。

基于腺病毒的递送方式

基于腺病毒的基因递送系统在安全性方面表现良好，其非整合特性经过多项临床试验的验证，已成为慢病毒的重要替代选项。与AAV和慢病毒载体相比，腺病毒具备显著的扩增装载能力，但其高免疫原性可能会干扰基因编辑效果。目前，应用较广泛的Ad5血清型依赖CAR受体进行细胞转导，这在一定程度上限制了其组织适用性。

最新研发的Ad5/F35嵌合体成功突破了CAR受体的依赖性，同时，gutless腺病毒载体（仅保留必要的包装序列）不仅减少了免疫原性，还扩大了载体容量（可达33kb），非常适合表达长的或多个转基因。在临床转化方面，腺病毒载体展现了多重突破：例如，EBT-101作为首个静脉注射型CRISPR-HIV治疗载体，已启动I/IIa期临床试验；此外，针对肿瘤治疗的多项临床前研究也证实了其在实体瘤靶向中的优势。

需要强调的是，尽管FDA已经批准了首款腺病毒基因疗法，但基于CRISPR的腺病毒疗法目前仍处于临床实验阶段。随着技术的不断发展，未来有望实现更广泛的应用和更显著的治疗效果。

总的来说，XPJ在基因治疗领域的持续创新与研究，期待为患者带来更安全、高效的治疗方案，推动相关治疗技术的进步与应用。