XPJ人小胶质细胞HMC3培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人小胶质细胞HMC3
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：MEM+10%FBS+1%P/S
传代方法：第一次建议1:2传代
传代情况：2天换液
备注：用无菌离心管收集培养基，留作过渡对比培养。如果对比效果不佳，建议直接购买XPJ的完全培养基。

二、细胞处理及培养步骤

收到细胞后，待其达到良好状态后，用完全培养液灌满并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。收到细胞时，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶，进行消毒后放入超净台内进行严格的无菌操作。随后，将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，再进行下一步处理。请在显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（最好40x、100x、200x各一张）。前三天的照片将作为重要的售后依据，若不提供照片则默认收到状态良好。

细胞传代步骤

a. 细胞传代：如未超过80%汇合度，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基放入37℃、5% CO2孵箱中继续培养；如汇合度超80%，即可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用无钙镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，并观察细胞状态，一旦细胞大部分变圆并脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，确保其完全脱落后吸出。将细胞悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液后加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

细胞冻存步骤

b. 细胞冻存：当细胞覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，使用PBS清洗细胞一次；然后添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，并轻轻吹打以使其脱落。随后将悬液转移至15ml离心管中进行1000RPM离心5分钟；

接着，弃去上清，沉淀的细胞加入1mlXPJ无血清冻存液（货号：C7001），混匀后放入冻存管中。将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中保存24小时以上后再转入液氮罐中。

细胞复苏步骤

c. 细胞复苏：从液氮中取出冰冻细胞管（请佩戴防护面具），迅速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁；将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，进行1000RPM离心5分钟；

弃去上清，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，并放入37℃、5% CO2细胞培养箱继续培养；第二天更换为新鲜完全培养基。

四、注意事项

在运输过程中，某些细胞可能不牢靠导致脱落，这是正常现象。如脱落较多，可将所有培养液收集至离心管，做过渡培养。在沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打、重悬，消化1-2分钟后再加5ml完全培养基终止反应。再次离心后，弃去上清，再添加1-2ml完全培养基重悬。随后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，再放入37℃、5% CO2细胞培养箱继续培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题且可重发的情况包括：运输中细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等情况；细胞污染问题需在收到产品48小时内提供真实实验结果；常温发货的细胞在静置24小时后，干冰发货的细胞在复苏后24小时如未存活（需提供照片）；干冰发货的细胞复苏后24小时及常温发货细胞静置4小时后未开封若出现污染，均可重发；细胞活性问题需在收到产品7天内提供真实实验结果，以台盼蓝染色法鉴定活力；收到细胞当天及第2、3天需拍照，若超过3天未告知视为产品合格。若出现问题需提供出现问题时的照片，以及详细操作步骤，与技术人员沟通后根据情况判定责任，并重发。

2）细胞出现问题不予重发的情况包括：因客户造成的污染、不正确操作导致的细胞状态不佳、非推荐培养体系影响细胞状态等；若未提供细胞培养前3天照片的情况也不予重发；两天内未告知收到细胞的状态不良亦不重发等。