在细胞融合的研究领域，有多种常见的方法，包括转动法和离心法。通常，脾细胞与骨髓瘤细胞的融合比例在1:1到10:1之间，最常用的比例为3:1或5:1。

试剂与材料

准备以下试剂与材料以进行细胞融合：

• 供融合用的脾细胞及骨髓瘤细胞。
• 1640培养液100ml。
• 完全1640液100ml。
• 25%FCS－1640液50ml。
• HAT培养液100ml。
• 50%PEG：取分子量4000，高纯度的（日本进口或Serva）PEG10g放入25ml瓶中高压灭菌，使用前与预热至40℃的1640液10ml等量（W/V）混合，以酚红检查pH，通常不需调节。如需调整，可使用HCl或NaHCO3。
• 10ml和50ml的灭菌沉淀管或瓶。
• 40孔塑料培养盘。

操作步骤

以下是细胞融合的具体操作步骤：

1. 准备脾细胞。
2. 在50ml沉淀管中混合108脾细胞和107小鼠骨髓瘤细胞，然后加入50ml的25%FCS－1640液。
3. 在室温下以400g离心3分钟，使细胞沉淀。
4. 小心去除上清液。
5. 轻敲管底，使沉淀流动，然后将沉淀管置于40℃水浴中达到融合温度。
6. 向沉淀中缓慢滴加预热至40℃的50%PEG 8ml，边加边轻摇沉淀管，观察到颗粒的出现，滴加过程应持续2分钟。
7. 加入1ml的1640液，边加边摇动，持续1分钟。
8. 重复上步，再加入1ml的1640液，边加边摇动，持续0.5分钟。
9. 再重复上步一次。
10. 加入1640液15ml。
11. 在室温下以400g离心1分钟，使细胞沉淀。
12. 去除上清液，轻敲管底，加25ml含有HAT的完全1640液。
13. 将融合的细胞液滴加到前一天已种有饲养细胞的40孔塑料培养盘中，每孔1滴（约0.05ml）。
14. 轻轻摇动后，将其放入5%CO2饱和湿度的37℃培养箱中进行培养。
15. 在第3、6、9、10天更换为含HAT的完全1640培养液，注意轻吸上清液，避免吸出固定在孔底的细胞，并根据需要添加适量的饲养细胞。
16. 在第12、15天再次加入含有HAT的完全1640培养液。在每次换液前，用倒置显微镜观察，通常在10天左右可观察到杂交瘤细胞的生长。大多数杂交瘤细胞会在10至20天内出现，但也有的可能在1个月左右才会显现。出现杂交瘤细胞后，迅速吸取上清液并检查抗体。
17. 对继续生长的杂交瘤细胞进行增殖传代。在传代过程中，可根据情况取消HAT液和完全1640液，并用10%FCS－1640液替代。同时，将细胞保存于液氮中并进行克隆化，期间需定期检查抗体，以防止抗体细胞的变异和流失。

通过以上步骤，您可以有效地进行细胞融合，推荐使用XPJ品牌的试剂以确保实验结果的可靠性和准确性。选用XPJ的产品，不仅能提升实验的效率，还能保证高质量的细胞融合效果。